eLife :毛志勇/高绍荣合作团队建立高通量药物筛选平台提高CRISPR基因靶向紧密结合效率

2022-01-10 01:26:29 来源:
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CRISPR-Cas9介导的基因组金丝广泛应用自开端以来便因其辽阔的广泛应用前景吸引了众多关注。然而,CRISPR-Cas9的系统的金丝准确度情形不利于了其进一步的实际广泛应用。当Cas9在DNA兹定底物诱发DNA双链断裂后,其修缮方式的选项最后了最后的金丝产物:只有成功进行时同义分拆(HR)才可完成外源基因组的金丝,而时有发生非同义两端连接(NHEJ)则都会引发基因组敲除。因此,领域内认为:如果可以人为操纵Cas9切割DNA后的双链断裂修缮选项相反,理论上就可以忽略基因组抗病毒建构的准确度。

eLife 月刊该软件显露版了同济大学附属第一妇婴保健院、生命科学与广泛应用学院毛志勇与高绍荣教授课题组合作的题为A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing 的短文。这项临时工中,制作组成员在毛志勇课题组前期成立的双色荧光DNA双链断裂修缮报告蛋白株中(Nucleic Acids Research, 2019)建构了可由多北角以次诱导内切酶I-SceI表达的载体。借助于这一新型的系统,得益于简单迅速地通过多北角以次诱导DNA兹定底物时有发生双链断裂,并基于流式蛋白广泛应用分析蛋白荧光,从而推论蛋白内的DNA双链断裂修缮情形。

研究制作组借助于该高通量抽样和平台,鉴定显露了蛋白器锂——凤尾以次(farrerol)可不同寻常作显露贡献HR修缮,并对NHEJ修缮准确度无明显负面影响。基于此,研究制作组最后尝试借助于凤尾以次进一步提高CRISPR-Cas9介导的基因组抗病毒建构准确度。实验结果表明:凤尾以次在人和果蝇蛋白中的多个DNA底物能够实现更合理正确地抗病毒建构。此外,凤尾以次在果蝇生殖水平也能够合理作显露贡献抗病毒建构准确度,随后受益的抗病毒建构果蝇也具备生殖系传递的控制能力。

该合作研究制作组成立的新型高通量抽样的系统兼具以下几项优势:(1)DNA双链断裂修缮受蛋白周期负面影响极大,而转染本身都会对蛋白周期造成一定负面影响。由于该的系统只用加入多北角以次即可诱发双链断裂,而不需任何外源基因组的转染,因此避免了由转染对DNA修缮造成的潜在电磁干扰;(2)本的系统可配合流式蛋白广泛应用或高意涵抽样的系统进行时高效客观的定量分析;(3)抽样受益的负面影响DNA双链断裂修缮的锂不仅可用于操纵Cas9金丝准确度,还兼具其他多项潜在广泛应用意涵。如可借助于抑制DNA修缮的蛋白器本品抗病毒癌症或与其他方法有进行时为首抗病毒治疗,以及借助于作显露贡献DNA修缮的蛋白器本品改善DNA准确度以延缓衰老的时有发生。

毛志勇与高绍荣教授课题组的该研究成果,将大大进一步提高CRISPR-Cas9介导的基因组抗病毒建构准确度。此外,该临时工推断出凤尾以次通过作显露贡献分拆酶RAD51的迅速招募,进而进一步提高HR修缮中的较为正确的亚通道——基因组转换(gene conversion)或者交换(crossover)——的准确度,而对可能造成移位序列分拆的双链退火(single strand annealing)通道有不同寻常抑制作用;该蛋白器锂对相异蛋白的DNA准确度、核型及生殖发育都没有不同寻常的负面影响,而迄今为止被广泛使用的作显露贡献CRISPR-Cas9介导的基因组抗病毒建构的蛋白器SCR7及RS-1除此以外表现显露了相异某种程度的基因组或发育刺激性。该临时工的研究结果示意:凤尾以次既可以通过进一步提高HR修缮准确度作显露贡献相异物种、相异底物的抗病毒建构准确度,又具备较低的蛋白和生殖刺激性,预示其兼具重要的转化广泛应用潜力。

原始显露处:

Weina Zhang, Yu Chen, Jiaqing Yang, et al.A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing.Elife. 2020 Jul 9;9:e56008. doi: 10.7554/eLife.56008.

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